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本文介紹了實(shí)驗(yàn)室常見的液相檢測器的原理，并對它們在實(shí)踐中的應(yīng)用的優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行分析。

01
紫外-可見光檢測器

紫外檢測器是應(yīng)用最廣泛的檢測器，幾乎所有的液相儀都配有該檢測器，絕大部分藥物在該檢測器中都有響應(yīng)。它常見的兩個(gè)小分支是可變波長檢測器和二極管陣列檢測器。

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原理

遵循的是朗伯比爾定律：當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時(shí),其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收層厚度b成正比。如果厚度固定，公式可表示為A=kc。也就是說，理論上供試品的響應(yīng)值與濃度做線性回歸的話，應(yīng)該是一條經(jīng)過原點(diǎn)的曲線。這就是含量測定外標(biāo)法的理論依據(jù)，但實(shí)際上由于儀器的進(jìn)樣誤差、人員操作誤差、流動(dòng)相的本底吸收等因素的影響，線性不可能經(jīng)過原點(diǎn)，線性方程中都有一個(gè)不是零的截距。這就是對照品濃度和供試品濃度應(yīng)接近的原因，線性如果經(jīng)過原點(diǎn)，任何對照品的濃度都可以用來測定供試品的結(jié)果。線性不經(jīng)過原點(diǎn)，對照品濃度與供試品濃度相差越大，計(jì)算結(jié)果誤差越大。由這個(gè)討論我們又扯出另一個(gè)話題，就是有關(guān)物質(zhì)檢測項(xiàng)的自身對照溶液濃度應(yīng)該是多少的問題。比如原料藥，有將供試品稀釋1000倍，有稀釋100倍的，到底哪個(gè)濃度合適？我想之前的討論可以給出一個(gè)合理的答案了，就是如果截距很小，二者區(qū)別不大，隨便那個(gè)濃度都可以。如果截距較大，則應(yīng)選擇和雜質(zhì)規(guī)定限度附件的濃度，一般是稀釋1000倍。較小或者較大怎么判斷，個(gè)人認(rèn)為可以5%為分界線。當(dāng)然，最終還是看回收率的結(jié)果，能夠滿足回收率的要求就可以。

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優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)很多，讓人印象深刻的就是憨厚，等度梯度緩沖鹽隨便用，好說話的一塌糊涂。還有就是供試品的量與響應(yīng)者呈良好線性，方便計(jì)算檢測結(jié)果。另外適用范圍較廣，只要有紫外吸收的物質(zhì)都可以應(yīng)用。

缺點(diǎn)不多，個(gè)人認(rèn)為最大的缺點(diǎn)只有兩個(gè)：一個(gè)是樣品必須有紫外吸收，另外一個(gè)就是對流動(dòng)相有一定的要求，流動(dòng)相的紫外吸收應(yīng)盡可能的小，否則會有較大的本底吸收。本底吸收也是截距的一大來源，樣品的響應(yīng)等于本身的吸收減去流動(dòng)相本底吸收，如果本底吸收為固定值b的話，樣品在儀器上實(shí)際的響應(yīng)者為A=kc-b。流動(dòng)相的影響在有關(guān)物質(zhì)檢測中較為明顯，因?yàn)殡s質(zhì)量小，響應(yīng)弱，流動(dòng)相的影響就較大，這個(gè)需要注意。就是說開發(fā)方法時(shí)檢測波長應(yīng)盡可能大于流動(dòng)相的截止波長。

02
示差折光檢測器RID

RID是一種通用檢測器，對所有樣品都有響應(yīng)。

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原理

示差檢測器是基于連續(xù)測定樣品流路和參比流路之間折射率的變化來測定樣品含量的。光從一種介質(zhì)進(jìn)入另一種介質(zhì)時(shí)，由于兩種物質(zhì)的折射率不同就會產(chǎn)生折射。只要樣品組分與流動(dòng)相的折光指數(shù)不同，就可被檢測，二者相差愈大，靈敏度愈高，在一定濃度范圍內(nèi)檢測器的輸出與溶質(zhì)濃度成正比。

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優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)是通用，沒有不能檢測的。

最大缺點(diǎn)：靈敏度低，一般來說有關(guān)物質(zhì)檢測不能用它，RID一般用于含量測定；另一個(gè)缺點(diǎn)由它的原理決定，只能等度，所以多組分的分離存在問題。還有平衡時(shí)間過長，對環(huán)境要求高（尤其是室溫的波動(dòng)）也是讓操作人員困擾的因素。

03
蒸發(fā)光散射檢測器ELSD

一種新型的通用檢測器，用于不易揮發(fā)的組分。靈敏度一般來說介于紫外檢測器和示差折光檢測器之間。

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原理設(shè)

用惰性氣體霧化洗脫液，在加熱管（漂移管）中將流動(dòng)相蒸發(fā)，樣品顆粒進(jìn)入檢測器散射激光光源發(fā)出的光，光信號轉(zhuǎn)化為電信號被輸出。

原理看起來很高大上，且靈敏度也還可以，面對如此多的沒有紫外響應(yīng)的化合物，理論上說應(yīng)該可以一統(tǒng)江湖了。事情總有但是，下個(gè)章節(jié)詳細(xì)評論ELSD的優(yōu)缺點(diǎn)。

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優(yōu)缺點(diǎn)

優(yōu)點(diǎn)就是通用，不論有沒有紫外響應(yīng)，它都有響應(yīng)，只要揮發(fā)性弱于流動(dòng)相即可。且可以走梯度，可以用于分離復(fù)雜的混合物。

但是……缺點(diǎn)也很多。最大的也是最讓人無法接受的缺點(diǎn)是濃度與響應(yīng)者不呈線性，二者的對數(shù)呈線性關(guān)系。線性非常差，線性范圍不大，相關(guān)系數(shù)非常差，還有截距非常大。由于這個(gè)缺點(diǎn)，我想大家已經(jīng)明白該檢測器單點(diǎn)外標(biāo)法絕不可行，所以該檢測器一般用于外標(biāo)兩點(diǎn)法（供試品響應(yīng)值需在兩個(gè)對照品之間，不允許外延）檢測含量；有關(guān)物質(zhì)很少用該檢測器。大家應(yīng)該能夠理解，每個(gè)雜質(zhì)都要配制兩個(gè)不同濃度的對照品溶液，且供試品響應(yīng)值在兩個(gè)對照之間（做不到的，雜質(zhì)的量無法預(yù)測，不像含量），這是一間多么讓人崩潰的事情。

另一個(gè)缺點(diǎn)是流動(dòng)相需要能揮發(fā)，也就是意味著不能存在不易揮發(fā)的組分，也就是說最常用的磷酸鹽系列不能用了。還有需要提高氣體，操作繁瑣，會產(chǎn)生有害氣體等。

04
其他

還有電化學(xué)檢測器、化學(xué)發(fā)光檢測器等因?yàn)閼?yīng)用太少筆者本人也不懂不知道怎么寫，就不在本文中介紹。