制藥用水是藥品生產過程中重要的原輔材料,在新版GMP的指導下保證用水質量、保證產品質量。制藥用水需要做哪些項目的檢測?需要注意什么問題?如何驗證?跟小析姐一起來看看吧。
制藥用水所檢項目有哪些?
制藥用水根據不同的使用范圍分為飲用水、純化水、注射用水和滅菌注射用水。這里我們只針對純化水(PW)和注射用水(WFI)進行分析討論。
根據中國藥典規定,PW需檢驗項目為:性狀、酸堿度、氨、硝酸鹽、亞硝酸鹽、電導率、總有機碳(TOC)、不揮發物、重金屬、微生物限度。
WFI所需檢驗項目與PW相比,將酸堿度更換為pH值,增加了細菌內毒素控制,其余檢驗項目與PW基本相同,但是微生物的控制標準要嚴于PW的標準。
微生物限度檢測方法的確認
根據非無菌產品微生物限度檢測方法的要求,應進行培養基適用性檢查和計數方法適用性試驗。純化水培養基適用性檢查方面,相應進行R2A瓊脂培養基的適用性檢查,菌株為銅綠假單胞菌和枯草芽孢桿菌。以及無菌培養試驗。
方法:取不大于100cfu菌液,于購買的R2A瓊脂培養基,快速涂布,每一菌株平行2個平板。同樣操作涂布與中檢院購買的對照培養基,培養5天。
無菌培養試驗:取2平皿,作為陰性對照培養。
標準:被測培養基上的菌落平均數與對照培養基上的菌落平均數比值應在0.5-2之間,菌落形態、大小一致。
無菌培養,培養基上無微生物生長。
純化水計數方法適用性方面,水作為無抑菌作用的溶劑,進行微生物回收試驗意義不大,因此,應不進行計數方法適用性試驗。R2A培養基,營養欠豐富,有利于損傷微生物的回收,培養時間不低于5天。
準備工作注意哪些?
(1)儀器設備及耗材:
檢測前要根據所要檢測的項目,檢查所用儀器/設備(如天平、pH計、電導率儀、培養箱等)是否經過了校準,是否在校準效期內,有些儀器還需要使用前校準或日校,比如天平,pH計。
微生物限度檢驗所用的生物安全柜(或超凈工作臺)、微生物過濾系統和培養箱應保證在確認效期內。用到的關鍵耗材,如微孔濾膜及濾杯等物料應保證其無菌性,可購買一次性無菌過濾器,也可在經驗證的滅菌程序下滅菌,并在經驗證的有效期內使用,但微孔濾膜不建議用戶自行濕熱滅菌,因為濕熱滅菌可能會引起濾膜孔徑的改變,除非有充分的證據證明滅菌后的濾膜仍滿足使用需求。這些的確認合格與否,將直接關系到檢驗結果的準確性。
細菌內毒素的檢驗可以在超凈工作臺內進行,也可以在普通試驗臺上進行試驗操作,但仍需注意操作環境的潔凈狀況,操作房間應保持較好的衛生狀況,避免環境對測試結果的影響。
(2)試劑試液
檢查要檢測項目所用到的試劑是否在有效期內。
pH計校準所用標準緩沖液是否合適,一般定點用的緩沖液與所測樣品的pH值接近,樣品的pH值要在定點和調斜率的緩沖液pH值范圍內。pH緩沖液的溫度應在25℃±2℃范圍內。
檢測微生物限度所用的培養基為R2A瓊脂培養基,配制時應使用在有效期及開瓶有效期內的干粉培養基,培養基應進行培養基適用性檢查,中國藥典規定,如培養基配制過程已經過驗證,則可以只針對每批干粉培養基進行適用性檢查,EP和USP則要求須對每個配制批進行檢查。
檢測細菌內毒素所用鱟試劑和內毒素標準品是否在效期內,凝膠法鱟試劑應進行靈敏度復核試驗,光度法用鱟試劑應進行標準曲線的可靠性試驗。
影響電導率結果的因素?
影響電導率測定結果的因素有樣品的溫度和可溶性氣體(如空氣中的CO2)。
將取樣容器取滿,密封,應在盡量短的時間內進行測定,能夠減少可溶性氣體對測定結果的影響。
測定TOC時的注意事項?
TOC測定時,應避免有機物和CO2對測定結果的影響。
取樣時應采用密閉玻璃容器,容器頂空應盡量小,取樣后,應立即測試,以減少塞子和容器對測定結果的影響。
測定需比色的檢驗項目時的注意事項
在測定硝酸鹽、亞硝酸鹽、重金屬和氨時,均采用比色法,需要注意遵守平行原則,須采用同套的比色管,對比時所有比色管中液體應體積相同。觀察方式有兩種,一種是在白色背景上自上而下透視,適于色澤較淺時采用,另一種是在白色背景前平視觀察,適于色澤較深時采用。同時檢驗人員不應有色弱或色盲等。
微生物限度檢查時注意事項?
人員應經過培訓且考核合格,應具備微生物的基礎知識和潔凈室的行為規范。進入潔凈區前后應檢查潔凈區內壓差及溫濕度是否在規定范圍內;準備所需物品和樣品經消毒劑擦拭消毒后,放入傳遞窗對表面進行紫外消毒,紫外消毒只能作為輔助手段,而不能完全代替化學消毒劑,紫外消毒時應注意避免對樣品的影響。
檢驗時,最好將檢驗所用物品器具和樣品一次性全部放入檢驗設備中,但實際工作中如物料很多,全部傳入影響操作和氣流,可以分多次,一般先檢驗WFI再檢驗PW。檢驗開始前,手部應放入設備內與物料一起自凈數分鐘。操作進行中,應避免微生物的污染,手部最好不要離開操作區域,不可避免時,應注意對手部及腕部的消毒。檢驗中動作幅度要小,避免影響氣流流向。
應采用薄膜過濾法對WFI及PW進行檢驗,樣品過濾后,應保證濾膜的干燥度。貼濾膜時,應避免產生氣泡,而影響微生物的生長。水系統運行穩定時,為了使檢驗結果更加能反映出水系統的真實情況,樣品檢驗量在滿足法規的前提下,可根據樣品中微生物負載情況定期評估后確定。
檢驗過程中應全程持續監測沉降菌,檢驗結束后要對設備表面和人員雙手進行表面微生物監測,浮游菌和懸浮粒子也應定期監測。樣品培養時,可不必逐天記錄微生物生長數量,但應注意避免個別時出現嚴重的菌落蔓延情況而導致無法計數。
細菌內毒素檢查時注意事項
細菌內毒素工作標準品和鱟試劑在使用前應逐支檢查外觀,發現安瓶有裂縫,或試劑顏色改變時,不能使用,使用前應保證其溫度處于室溫。開安瓿瓶時要注意安全問題,必要時可借助工具開啟。
溶解鱟試劑及混勻供試品和鱟試劑時,不要劇烈振蕩避免產生氣泡。
由于凝集反應是不可逆的,所以在反應過程中及觀察結果時應注意不要使試管受到振動,以免使凝膠破碎產生假陰性結果。乙醇消毒劑有可導致BET出現假陰性的風險,檢驗過程中應避免使用。
偏差調查
對測定結果不合格的樣品,應及時報告主管,并啟動OOS調查,找出根本原因,并制定預防措施,防止再次發生類似情況。所有檢項測定完成后,出具檢驗報告。
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