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溶出度測試是幾乎所有非真溶液藥品的必備測試。溶出度測試主要用于制藥行業，作為監控劑型配方和生產過程的質量控制工具。大多數監管機構認為溶出度是大多數固體劑型的高度關鍵質量特征。

監管機構使用溶出度測試來提供從關鍵生物批次到商業化產品的質量聯系。因此，溶出度測試的開發和驗證是確保測試穩健性和臨床相關性的關鍵因素。但是在實際工作中，經常碰見異常數據。在對文章《Specification of Drug Substances andProducts __ Dissolution》進行學習后，結合筆者自己的理解來總結需要注意的地方。下文從以下幾點來進行說明。

Part 1 儀器

為了使溶出度測試普遍用于控制藥物劑型的一致性，必須對所用儀器的類型進行控制。美國藥典<711>“溶出度”描述了溶出度測試中使用的幾種儀器類型。美國藥典裝置1(籃)和裝置2(槳)是目前最常用的速釋和控釋劑型的裝置。美國藥典以外的藥典，如日本藥典、英國藥典和歐洲藥典、中國藥典均包含美國藥典中描述的儀器1和儀器2。目前對此兩種裝置都有標準的要求。中國在2016年發布《藥物溶出度儀機械驗證指導原則》表明與國際接軌。

在確保符合《藥物溶出度儀機械驗證指導原則》情況下平時也要注意一些特殊情況。槳葉有時部分涂有特氟隆。這種涂層可能會從槳葉上剝落和部分脫落，導致容器內流體動力學的流動擾動。槳葉可能生銹，并有缺口或凹陷；這可能對溶解流體動力學產生不利影響，也是污染源。有些藥品不銹鋼桿槳在某些介質對溶出度有影響如pH1.2條件下的苯磺酸氨氯地平片，也需要引起注意。徹底清潔槳葉對于防止藥物或介質的污染非常重要。

籃子需要小心檢查。使用時，它們可能會磨損、變形或扭曲。篩網尺寸可能會隨著時間的推移而變化，尤其是在酸性介質中使用時。這些變化可能會影響溶解結果。如果使用后不立即徹底清洗，籃子特別容易積聚明膠或輔料，造成污染。

溶出杯如果沒有清洗干凈，可能會造成污染。重復清洗后刮傷和腐蝕的容器應丟棄。在溶解過程中，蓋子始終需要到位，以防止蒸發。湯麗娟湯老師有篇文獻《Introduction of dissolution error as a result ofdifferent openings in vessel covers》詳細講述了蒸發量對溶出度的影響，有興趣可以閱讀。

儀器的震動也要引起注意。平時應注意儀器的維護和保養，以確保平穩運行。外部振動源可能包括平臺上的其他設備，如振動篩、離心機或超聲儀等。還應避免沉重的腳步聲和關門聲。

Part 2 沉降籃

在溶出度測試過程中傾向于漂浮或移動的劑型會產生可變性和結果偏差的問題。沉降籃通常用于在溶出度測試中固定這種劑型。溶出度測試中使用的沉降籃有很多種（見下圖），有些是自制的，有些是市售的，沉降籃的類型會影響結果。USP中規定了很多中的沉降籃，各個儀器公司也有市售的沉降籃。在需要沉降籃的情況下，必須在方法和任何法規提交對沉降籃的詳細說明和使用沉降籃的原因。當比較不同的沉降籃(或沉降籃與無沉降籃)時，測試必須與每個沉降籃同時進行。每種沉降籃類型必須根據其在不抑制藥物釋放的情況下保持容器底部劑量的能力進行評估。沉降籃會顯著影響藥物的溶出度，不同沉降籃類型(或無沉降籃)的比較應在溶出方法確定前期進行驗證。沉降籃的設計必須在方法中明確說明。轉移方法時，沉降籃必須在任何后續測試設施中盡可能緊密地復制。

沉降籃的使用應需要符合一些要求：

沉降籃不應抑制或影響溶解。膠囊或者片劑應該可以自由溶解，劑量的任何部分都不應該截留在沉降片之下或之內。

劑型應該總是落在中心溶解容器的底部。

結果應該是可重現的；可變性不應該由沉降籃的形狀引入。
形狀應該易于定義和制作，最好是常見的。

“Effects of Sinker Shapes onDissolution Profiles”這篇文獻中提到了不同沉降籃的影響，通過下面數據可以看到沉降籃的影響。

Part 3 溶出方法的穩健性

由于溶出度試驗貫穿于整個藥品研發的始終，因此溶出方法的穩健性也至關重要。確定溶出方法的關鍵測試參數通常通過對每個溶出度參數進行細微變化來評估。數據評估將建立測試參數所需的必要控制，以保持方法的一致性。這將有助于任何方法的轉移，并最大限度地減少故障排除的需要。穩健性研究應包括評估不同介質pH、轉速、沉降籃(如果適用)、介質脫氣、介質表面活性劑水平、介質溫度和過濾器的影響等等。
對于藥物來說介質pH、介質種類選擇、介質表面活性劑水平是需要重點考察的目標。藥事縱橫在《看明白新藥如何開發溶出方法，才能做好仿制藥》文章中詳細介紹了如何選擇合適的pH值、表面活性劑濃度、轉速來確保方法的穩健性。另外一篇《依托考昔為例：適度區分力的溶出方法開發與驗證》同樣是不可多得的確認溶出方法穩健性的好文章，值得多學習，應用在實際工作中。

Part 4 介質

介質中溶解的氣體可能會影響溶出度。粘附在片劑表面或籃篩上的氣泡會阻礙介質接觸，并會減慢溶解速度。顆粒會附著在容器或軸的玻璃表面的氣泡上。
介質的溫度也需要注意，有的儀器每個溶出杯都能顯示杯液溫度。如果沒有在進行實驗前就需要對杯液溫度進行核查。

如果溶出介質中含有表面活性劑，那么在使用中需要注意。首先表面活性劑不同廠家不同等級之間質量差距很大，因此在方法確定之前需要進行廠家和等級的篩選以及對比。表面活性劑的發泡特性也很難有效地使介質脫氣。將籃子放入表面活性劑介質時，表面氣泡可能會粘附在籃子底部，并顯著降低溶解速率。表面活性劑會帶來嚴重的清潔問題，尤其是當濃度很高時，例如超過0.5%，在自動取樣時取樣管線中，表面活性劑如十二烷基硫酸鈉可能需要多次沖洗才能確保完全去除。

不同表面活性劑帶來問題也不一樣，常用的十二烷基硫酸鈉，質量易于控制，與鉀鹽聯用容易析出，在低溫下同樣易析出。吐溫80批間質量差異大，操作沒有十二烷基硫酸鈉方便等。通過對參比制劑剖析選擇合適的表面活性劑。

介質的離子濃度同樣需要引起注意，不同國家的介質配置方法不同，離子濃度也不同，如日本藥典和中國藥典的pH6.8緩沖鹽。《Assessing the influence of media composition andionic strength on drug release from commercial immediate-release andenteric-coated aspirin tablets》（研如玉組織翻譯的評估溶出介質的組成和離子強度對商業化生產的阿司匹林速釋制劑和腸溶片釋放的影響）一文中詳細介紹了不同離子強度對藥物釋放的影響。在實際工作中可能需要考察不同離子強度的影響。

Part 5 觀察

準確的溶解發生在產品溶解時，不會受到溶解障礙的干擾，也不會受到任何來源的容器流體動力學干擾。因此，對測試的近距離視覺觀察非常重要。顆粒分解模式必須顯示自由分散的顆粒。異常溶解通常涉及以下一種或多種觀察結果：片劑的漂浮塊、旋轉、錐形、堆積、膠粘、膨脹、封蓋、“蛤殼”侵蝕、偏心定位、粘附、顆粒粘附在裝置或杯壁上、囊狀物、膨脹/橡膠塊或透明薄膜、明膠膠囊老化引起溶出度變慢等，還有可能為投片過程中 “位置相關的”。例如，如果片劑偏離中心，由于剪切力的作用，溶解速率可能會更高。也有文獻報道不同的投片位置造成溶出度差異。薄膜包衣片劑可能是粘性的，并且會引起與片劑位置相關的問題。孫亞洲孫老師在各中公開場合多次提到觀察現象的重要性，甚至于在溶出結束后的溶出顆粒的手感等。在孫老師的“API、制劑特性與溶出度、BE的相關性及案例分析”中詳細描述了觀察的一些現象，可以在實際工作中聯系起來。

隨著行業對溶出度的認知的提高，溶出度異常的一些現象得到了廣泛的認知，如堆積、漂浮、投片位置影響等，也有了一些手段來預防或解決。但溶出現象的觀察是貫穿于整個藥品研發甚至于藥品生命周期管理過程中。藥品研發過程中前期需要觀察參比制劑的溶出現象，了解溶出行為，甚至于需要根據溶出現象來調節溶出的方法，防止出現異常數據和批間誤差。之后的仿制藥開發中需要仔細觀察仿制藥的溶出現象，與參比制劑進行對比，與參比制劑的溶出現象一致。后期穩定性試驗中如膠囊劑型，明膠膠囊老化引起溶出度變慢是需要重點觀察的。藥品上市后穩定性試驗或每一次的變更申請試驗都需要進行觀察。

Part 6 取樣和過濾

1 取樣

取樣目前有自動取樣和手動取樣兩種。自動取樣省事省力，但是有時會帶來比手動取樣更多的問題。由于各種原因，采樣線經常是錯誤的來源：長度不相等、卷曲、磨損超出極限、取樣管線的部分或完全堵塞、斷開連接、殘留、混淆或交叉連接以及清潔不充分。泵管可能因經常使用或沖洗而磨損，可能需要更換。不同溶廠家溶出儀自動取樣方式不一樣，有注射泵和活塞泵兩種形式。理論上注射泵較好，每個取樣點后排空管路，即管路殘留為0，取樣時間較短。活塞泵無法完全排空管路，需要大量的介質來潤洗管路，取樣提前時間早。在線過濾方式上也有差異，有濾膜過濾和濾頭過濾。建議在使用自動取樣系統之前確定合適的方式。

手動取樣技術會因不同分析員之間人手的力量和大小的差異而引入誤差。通過過濾器的牽引速度可能變化很大。

2 過濾

過濾是溶出取樣過程中不可忽視的步驟。必須對過濾步驟進行評估，以確定適當量的溶液是否已經通過過濾器，從而最終過濾的溶液不會由于通過過濾器吸附的藥物損失而產生偏差。過濾是通常是防止未溶解顆粒進入分析樣品并進一步溶解。應注意過濾器孔徑不大于藥物粒度，這對于微粉化或納米顆粒尤其重要。過濾還可以去除可能會導致高背景不溶性輔料。過濾器的驗證通常包括制備合適的標準溶液(推薦最低和最高濃度)和完全溶解的樣品溶液。對于標準溶液，將過濾溶液的結果(應事先確定適當的廢棄量)與未過濾標準溶液的結果進行比較。對于過濾后的樣品溶液，應將結果與完全溶解和離心的樣品溶液進行比較。標準和樣品過濾效率的可接受范圍通常在未過濾標準溶液和未過濾但離心的樣品溶液的98%-102%之間。如果過濾步驟有干擾，需對不同廠家不同型號的過濾器、不同處理方式進行篩選。

仿制藥研究過程中，除了標準溶液和樣品溶液需要考察，參比制劑的濾膜影響同樣需要引起注意。

自動取樣溶出儀的濾膜吸附由于其管路問題可能比手動取樣更加復雜，管路對樣品可能會有吸附和干擾。已有文章（自動溶出儀對硝苯地平緩釋片(I)釋放度測定的干擾）報道自動取樣器對溶出度的結果有干擾。因此對于自動取樣溶出儀還需要增加管路吸附的干擾，與手動取樣進行對比。

Part 7 檢測

由于溶出度測試中通常會產生大量樣品，因此分析系統應該相對快速。用于溶出度測試的最常見的分析儀器是紫外可見分光光度法和帶有紫外檢測的高效液相色譜法。無論使用哪種方式，檢測方法都需要進行驗證。溶出方法學驗證相信各個公司都有自己的方式，因此在此文中就只簡單的提出幾個重要的容易忽視的地方。

1 線性

通常線性濃度需要包含檢出溶出度的最小量至最高預期濃度的120%的濃度范圍。劑型的線性測試應涵蓋產品的整個規格范圍。如有必要，分析前所有樣品應加熱至37℃(或規定的溶解溫度)；如果樣品接近漏槽條件，這一點尤其重要。

線性的驗證雖然比較簡單，但是有些情況不能忽視。對于較大規格或者特殊藥品而言，在檢出溶出度的最小量至最高預期濃度的120%的濃度范圍不一定成線性，可以用分段線性來解決。對于某些藥品外標一點法可能不適用，則需要采用標準曲線來進行每次溶出度計算。

2  準確度

一般來說，準確性是通過制備包含藥物和劑型中存在的其他成分(例如輔料、包衣材料等)的多個樣品來確定的。膠囊殼、涂料混合物、油墨和沉降籃也應在適當的地方添加。如果規格較大，藥物在輔料之前或之后加入介質的順序可能比較重要。例如，一些藥物需要在沒有輔料的介質中適當潤濕，反之亦然，其中輔料需要在引入藥物之前首先混合。如果規格較小或者藥物靜電較大，使得精確稱量變得困難時，可以采取溶液形式。如有必要，分析前所有樣品應加熱至37℃(或規定的溶解溫度)。
對于某些難溶性藥品，在介質中溶解較低，對照品溶液配制需要用適量的有機溶劑助溶，但是有機溶劑的比例不得過5.0%。

3 溶液穩定性

由于溶出度測試中通常會產生大量樣品，因此溶液穩定性是必需進行的實驗。一般對照品溶液和供試品溶液都需要進行考察。考察的時間盡可能的長，防止在后續工作中的特殊情況。如果在介質中藥品不穩定，可以通過不同的方式來解決。如可以考慮樣品控溫、加入穩定劑或者同時與降解產物檢測等方式。有些藥品在不同介質下的穩定性不一樣，可以考慮在不穩定的介質中加入pH調節劑調節至穩定的pH值等。通過對藥物不穩定方式進行分析選擇一種省力省時的方式是至關重要的。

Part 8 清洗

在許多實驗室中，不同的產品在同一設備上進行測試，清潔是一個關鍵問題，如果清洗不充分，可能會導致檢查失敗和錯誤的結果。使用富科思FADT-1200RC溶出儀時，溶出儀杯蓋是整體的，清洗溶出儀杯蓋就是一個容易忽視的問題。而在自動取樣的溶出儀中，自動取樣管線的清洗也是重點考慮對象。

Part 9 結束語

溶出曲線測試在目前的藥品研發過程中起著舉足輕重的作用。溶出曲線的數據需要準確無誤才能給處方和工藝準確的判斷。因此在進行溶出實驗時需要確認關鍵參數，在準確的“框架”中進行實驗，以免給出錯誤的判斷。
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